|
Rentgenová krystalografie se v posledních letech stala jednou z nejdůležitějších experimentálních technik pro studium proteinů, nukleových kyselin a jejich komplexů, ale také systémů jakými jsou viry nebo supramolekulární komplexy na úrovni atomového rozlišení. Uvedená metoda slouží k objasnění funkce proteinů, např. jejich enzymatické aktivity, vazebnosti, atd. Základním předpokladem pro stanovení struktury proteinů je vypěstování kvalitních krystalů vhodných pro difrakční analýzu. Krystalizace proteinů je empirická metoda spočívající v hledání individuálních podmínek a parametrů ovlivňujících vznik krystalů a v jejich následné optimalizaci. Cílem kurzu je seznámit studenty s metodami a technikami krystalizace. Studenti si v rámci cvičení samostatně vypěstují krystal určeného proteinu, který pak změří na difraktometru a na závěr se pokusí vyřešit jeho strukturu pomocí příslušného software.Obsah přednášek Krystalizace podstata a metody krystalizace, exprese a purifikace proteinů, vlastnosti roztoků a fázový diagram, automatizace v krystalizaci proteinů, nukleace a růst krystalů, kinetika růstu, standardní a pokročilé krystalizační metody, krystalizace membránových proteinů Řešení struktur teorie difrakce, zdroje rtg. záření, měření na synchrotronech, sběr difrakčních dat, řešení fázového problému, upřesňování řešené strukturyObsah cvičení metodika krystalizace makromolekulárních látek, krystalizační pokusy s proteiny (např. krystalizace lysozymu, proteinázy K, atd.), seznámení se s prací krystalizačních robotů, měření krystalů proteinu na difraktometru (ÚMG Praha), práce s PC v prostředí Unix a software pro krystalografy, úvod do řešení struktur proteinů pomocí uvedeného software
|
| Literature |
|
D. M. Bollag et al. Protein Methods, Wiley-Liss, Inc., NY USA 1996 A. Ducruix and R. Giege Crystallization of NA and Proteins, A Practical Approach, Oxford University Press, NY USA 1992 T. M Bergfors Protein Crystallization Techniques, Strategies and Tips, International University Line, CA USA 1999 J. Drenth Principles of Protein X-ray Crystallography, Springer Verlag Publishing, USA 1999 |